DP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422478

Panoramica

Ptgdr codifica il recettore murino della prostaglandina D2 (DP), un recettore accoppiato a proteine G che segnala principalmente attraverso Gs per aumentare i livelli di cAMP e attivare programmi trascrizionali dipendenti da PKA. DP viene attivato dalla PGD2 prodotta tramite il metabolismo dell’acido arachidonico e contribuisce alla regolazione del tono della muscolatura liscia, della permeabilità vascolare, dell’infiammazione delle mucose e del traffico delle cellule immunitarie. Nei leucociti e nei tessuti barriera, la segnalazione legata a DP interagisce con la produzione di citochine e la chemiotassi, modellando le risposte infiammatorie di tipo 2 e la comunicazione neuro‑immunitaria. Un’attività PGD2–DP disfunzionale è stata implicata in modelli sperimentali di infiammazione delle vie aeree di tipo asmatico, di malattie allergiche e di vie del dolore infiammatorio, rendendo Ptgdr un nodo utile per analizzare la segnalazione mediata da mediatori lipidici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ptgdr in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ptgdr insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ptgdr a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ptgdr per lo studio della segnalazione di DP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ptgdr critici per la funzione di DP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ptgdr per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ptgdr. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ptgdr per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ptgdr definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.