DOCK 5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405073-ACT

DOCK5 codifica per dedicator of cytokinesis 5, un fattore atipico di scambio di nucleotidi della guanina che attiva preferenzialmente le GTPasi della famiglia RAC per coordinare il rimodellamento del citocheletro di actina, lo spreading cellulare e la migrazione direzionata. Attraverso interazioni con proteine adattatrici nelle adesioni focali e nei ruffles di membrana, DOCK5 contribuisce alla segnalazione dipendente dalle integrine, alla formazione dei lamellipodi e alla regolazione della polarità cellulare. Queste funzioni collegano DOCK5 a processi quali il traffico delle cellule immunitarie, la dinamica epiteliale e i programmi di motilità associati all’invasione. La deregolazione della segnalazione DOCK5–RAC è stata analizzata nel contesto di un controllo citoscheletrico alterato e di fenotipi metastatici in molteplici modelli tumorali, nonché di perturbazioni delle reti di segnalazione infiammatoria.

DOCK 5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DOCK5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DOCK 5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DOCK5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DOCK5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DOCK 5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DOCK5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DOCK 5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DOCK 5 nelle cellule tumorali con espressione di DOCK5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.