DOC4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406806

Panoramica

TENM4 codifica la proteina transmembrana teneurina 4 (DOC4), una grande proteina di membrana di tipo II implicata nella comunicazione cellula–cellula, nell’adesione e nei segnali di guida che influenzano la strutturazione dei tessuti e la connettività neuronale. Attraverso interazioni mediate dai suoi domini extracellulari e da motivi di segnalazione intracellulari, DOC4 contribuisce all’organizzazione del citoscheletro, alla crescita dei neuriti e al mantenimento della polarità cellulare. Alterazioni dell’espressione di TENM4 o variazioni di sequenza sono state associate a fenotipi neurologici e sono state inoltre riportate in studi sul comportamento delle cellule tumorali, a supporto della sua rilevanza nei programmi di migrazione e invasione. Queste proprietà rendono TENM4 un bersaglio utile per analizzare le vie che collegano la segnalazione dipendente dall’adesione allo sviluppo e al rimodellamento cellulare associato a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DOC4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TENM4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TENM4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TENM4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DOC4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TENM4 per lo studio della segnalazione di DOC4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TENM4 critici per la funzione di DOC4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TENM4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DOC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DOC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TENM4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DOC4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DOC4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TENM4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TENM4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.