DNase II Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405046-ACT

Il gene umano **DNASE2** codifica la **DNasi II**, un’endonucleasi acida lisosomiale che degrada il DNA derivato da cellule apoptotiche, nuclei fagocitati e da altre fonti extracellulari o vescicolari dopo la fagocitosi. Eliminando il DNA all’interno dei compartimenti endolisosomiali, la DNasi II contribuisce a mantenere l’omeostasi degli acidi nucleici e limita l’attivazione aberrante del sensing immunitario innato e delle vie di segnalazione infiammatorie a valle. L’alterazione o la disregolazione dell’attività di **DNASE2** è stata associata a un difetto nella rimozione del DNA, a un aumento dei programmi di geni stimolati dall’interferone e a fenotipi infiammatori rilevanti per l’autoimmunità e lo stress ematologico. La funzione della DNasi II è quindi ampiamente studiata nel contesto di apoptosi, efferocitosi, biologia dei lisosomi e regolazione immunitaria guidata dagli acidi nucleici.

DNase II Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di DNASE2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

DNase II Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus DNASE2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione DNASE2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DNase II. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus DNASE2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DNase II nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DNase II nelle cellule tumorali con espressione di DNASE2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.