DnaJC12 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412707

Panoramica

DNAJC12 codifica DnaJC12, un co-chaperone di tipo J-domain che collabora con il macchinario HSP70 per regolare il ripiegamento proteico e la proteostasi nel citosol e nel reticolo endoplasmatico. Stimolando l’attività ATPasica di HSP70, DnaJC12 favorisce la maturazione e la stabilità delle proteine client e contribuisce a coordinare le risposte cellulari allo stress proteotossico. Questa rete di chaperoni interagisce con le vie ubiquitina–proteasoma e con i processi di degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD) per mantenere il controllo qualità delle proteine. Alterazioni della funzione di DNAJC12 sono state associate a una deregolarizzazione dell’omeostasi enzimatica e a fenotipi neuro-metabolici, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio dell’adattamento allo stress e delle vie di maturazione proteica nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJC12 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DNAJC12 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DNAJC12 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DNAJC12 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DnaJC12.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DNAJC12 per lo studio della segnalazione di DnaJC12, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DNAJC12 critici per la funzione di DnaJC12
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DNAJC12 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DnaJC12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DnaJC12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DNAJC12. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DnaJC12 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DnaJC12 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DNAJC12 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DNAJC12 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.