DHCR24 Plasmide Double Nickase (h): sc-405507-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DHCR24 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DHCR24 Double Nickase Plasmid (h) e il DHCR24 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DHCR24. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DHCR24 Antibody (A-4): sc-398938
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DHCR24 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHCR24 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHCR24 codifica la 24-deidrocolesterolo reduttasi, un enzima del reticolo endoplasmatico che catalizza la fase terminale della biosintesi del colesterolo riducendo il desmosterolo a colesterolo. Attraverso il suo ruolo nella via di Bloch, DHCR24 influenza la composizione degli steroli di membrana, l’organizzazione dei lipid raft e le reti di segnalazione sensibili agli steroli che si intersecano con l’omeostasi del RE e con le risposte allo stress ossidativo. L’alterazione dell’attività di DHCR24 può spostare l’equilibrio desmosterolo/colesterolo, con effetti sulla differenziazione cellulare e sull’adattamento metabolico in contesti dipendenti dagli steroli. Un’espressione o una funzione alterata di DHCR24 è stata riportata in disturbi del metabolismo del colesterolo ed è stata studiata in modelli di neurodegenerazione e oncologia per i suoi legami con la resilienza allo stress e il rimodellamento lipidico.
DHCR24 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHCR24 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHCR24. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHCR24. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHCR24 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.