DDX34 Plasmide Double Nickase (h): sc-411318-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDX34 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DDX34 Double Nickase Plasmid (h) e il DDX34 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DHX34. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDX34 Antibody (E-3): sc-514665
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDX34 Plasmide Double Nickase (h) | sc-411318-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDX34 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-411318-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHX34 (DDX34) codifica una RNA elicasi DEAH-box conservata che partecipa al metabolismo post-trascrizionale dell’RNA e alla regolazione della sorveglianza dell’mRNA. È associata al decadimento dell’mRNA mediato da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay, NMD) e a eventi di processamento dell’RNA che influenzano la stabilità dei trascritti e il controllo qualità, plasmando così i programmi di espressione genica durante la crescita e la differenziazione cellulare. L’alterazione dell’attività di DHX34 può modificare l’omeostasi dell’RNA e la segnalazione della risposta allo stress, rendendola rilevante per lo studio di vie che collegano la sorveglianza dell’RNA all’integrità del genoma e alla fitness cellulare. Studi molecolari hanno riportato un’alterazione dell’espressione o della funzione di DHX34 in stati trascrizionali associati a neoplasie, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in reti regolatorie dell’RNA rilevanti per la malattia.
DDX34 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHX34 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHX34. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHX34. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHX34 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.