DDX33 Plasmide Double Nickase (h): sc-404530-NIC

DHX33 (DDX33) codifica un’elicasi dell’RNA umana della famiglia DEAD-box che accoppia il rimodellamento dell’RNA dipendente dall’ATP alla biogenesi dei ribosomi e al metabolismo dell’RNA. DDX33 è stata implicata nella funzione del nucleolo, nella trascrizione/elaborazione dell’rRNA e nel coordinamento della capacità di traduzione con la segnalazione proliferativa, collegando l’omeostasi dell’RNA alla progressione del ciclo cellulare. Oltre ai ruoli di “housekeeping”, DDX33 partecipa alle vie di rilevamento dell’immunità innata supportando la segnalazione dipendente dall’RNA e può influenzare programmi trascrizionali infiammatori. Un’espressione o un’attività deregolata di DDX33 è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e delle risposte allo stress in contesti rilevanti per il cancro, rendendola un nodo utile per analizzare fenotipi guidati dall’elaborazione dell’RNA.

DDX33 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHX33 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHX33. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHX33. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHX33 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.