DDX1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405137-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDX1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DDX1 Double Nickase Plasmid (h) e il DDX1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DDX1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDX1 Antibody (A-7): sc-271438
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDX1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDX1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDX1 (DEAD-box helicase 1) è un’elicasi dell’RNA umana ATP-dipendente che rimodella l’RNA e i complessi ribonucleoproteici per supportare la maturazione, il trasporto e la traduzione dell’RNA. Partecipa al metabolismo dell’RNA associato alla trascrizione e contribuisce al mantenimento dell’integrità del genoma tramite interazioni con i macchinari di risposta al danno al DNA e di riparazione. DDX1 è stata inoltre implicata nella segnalazione dell’immunità innata attraverso la regolazione delle vie di sensing dell’RNA e dei granuli ribonucleoproteici responsivi allo stress. Un’attività o un’espressione deregolata di DDX1 è stata associata ad alterazioni della proliferazione e dell’omeostasi dell’RNA in contesti rilevanti per il cancro, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla funzione delle elicasi dell’RNA.
DDX1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DDX1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DDX1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DDX1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DDX1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.