Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DDIT3/CHOP/GADD153 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419970-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DDIT3/GADD153/CHOP Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR Activation Plasmid (m) e dal DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Ddit3. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DDIT3/GADD153/CHOP Antibody (B-3): sc-7351
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DDIT3/CHOP/GADD153 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-419970-ACT | 20 µg | $397.00 |
Ddit3 codifica il fattore di trascrizione inducibile dallo stress DDIT3/CHOP/GADD153, un effettore centrale della risposta integrata allo stress e della risposta a proteine mal ripiegate (UPR) guidata dallo stress del reticolo endoplasmatico (RE). CHOP forma eterodimeri con membri della famiglia C/EBP per rimodellare programmi di espressione genica che influenzano apoptosi, autofagia, equilibrio redox e controllo del ciclo cellulare durante stress proteotossico e metabolico. Nelle cellule murine, Ddit3 è comunemente usato come indicatore molecolare dello stress del RE a valle della segnalazione PERK–eIF2α–ATF4 e si interseca con la disfunzione mitocondriale e con vie infiammatorie. Un’attività deregolata di Ddit3 è stata implicata in modelli di malattie metaboliche, neurodegenerazione, danno tissutale e biologia tumorale, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sull’adattamento allo stress e sulle decisioni di destino cellulare.
DDIT3/GADD153/CHOP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ddit3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
DDIT3/GADD153/CHOP Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ddit3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ddit3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di DDIT3/GADD153/CHOP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ddit3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da DDIT3/GADD153/CHOP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via DDIT3/GADD153/CHOP nelle cellule tumorali con espressione di Ddit3 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.