Dcun1D1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405179-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dcun1D1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Dcun1D1 Double Nickase Plasmid (h) e il Dcun1D1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DCUN1D1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dcun1D1 Antibody (3E1): sc-81835
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dcun1D1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405179-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dcun1D1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405179-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DCUN1D1 codifica Dcun1D1, un fattore accessorio delle ligasi E3 ubiquitina cullin-RING che promuove la neddilazione delle proteine cullina e, di conseguenza, potenzia la proteostasi dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la regolazione dell’attivazione delle culline, Dcun1D1 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e il turnover dipendente dai segnali di proteine regolatorie chiave. Un’alterata espressione o amplificazione di DCUN1D1 è stata collegata a programmi di crescita deregolati ed è stata riportata in molteplici contesti tumorali, supportandone l’impiego come nodo molecolare per lo studio delle vie oncogeniche di modificazione ubiquitino-simile. La ricerca su DCUN1D1 aiuta a chiarire come la coniugazione di NEDD8 si interfacci con l’ubiquitinazione nel controllo della stabilità proteica e della fitness cellulare in condizioni di stress.
Dcun1D1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCUN1D1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCUN1D1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCUN1D1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCUN1D1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.