Dcun1D1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405179-NIC

DCUN1D1は、カリリン‐RING型E3ユビキチンリガーゼの補助因子であるDcun1D1をコードしており、カリリンタンパク質のネディル化（NEDD8修飾）を促進することで、ユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）を高めます。カリリンの活性化を制御することを通じて、Dcun1D1は細胞周期の進行、DNA損傷応答、ならびに主要な制御因子タンパク質のシグナル依存的な分解に影響を与えます。DCUN1D1の発現変化や増幅は、増殖プログラムの破綻と関連づけられており、複数の腫瘍で報告されています。これらの知見は、がん原性のユビキチン様修飾経路を研究するための分子ハブとしてDCUN1D1を活用できることを支持します。DCUN1D1に関する研究は、NEDD8結合（コンジュゲーション）がユビキチン化とどのように連携してタンパク質の安定性やストレス下での細胞の健全性を制御するのかを明らかにするのに役立ちます。

Dcun1D1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DCUN1D1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DCUN1D1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DCUN1D1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DCUN1D1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。