Cytokeratin 17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402008-ACT

KRT17 codifica la citocheratina 17, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che si assembla con cheratine partner per sostenere l’integrità strutturale delle cellule epiteliali e la loro resistenza allo stress meccanico. La citocheratina 17 è regolata in modo dinamico durante la riparazione delle ferite e negli stati iperproliferativi, collegando il rimodellamento del citoscheletro a processi quali l’attivazione dei cheratinociti, la migrazione cellulare e la differenziazione epiteliale. Un’alterata espressione di KRT17 è stata riportata in diversi contesti infiammatori e neoplastici, dove viene comunemente utilizzata come marcatore di fenotipi epiteliali di tipo basal-like o attivati. Come parte della rete dei filamenti intermedi, interagisce con programmi di segnalazione che coordinano l’organizzazione del citoscheletro, le risposte allo stress cellulare e l’omeostasi tissutale.

Cytokeratin 17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KRT17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cytokeratin 17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KRT17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KRT17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cytokeratin 17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KRT17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cytokeratin 17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cytokeratin 17 nelle cellule tumorali con espressione di KRT17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.