Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cytokeratin 17: sc-402008-ACT

KRT17 code la cytokératine 17, une protéine de filament intermédiaire de type I qui s’assemble avec des kératines partenaires afin de soutenir l’intégrité structurelle des cellules épithéliales et leur résistance aux contraintes mécaniques. La cytokératine 17 est régulée de manière dynamique lors de la réparation des plaies et dans les états d’hyperprolifération, reliant le remodelage du cytosquelette à des processus tels que l’activation des kératinocytes, la migration cellulaire et la différenciation épithéliale. Une expression altérée de KRT17 a été rapportée dans divers contextes inflammatoires et néoplasiques, où elle est couramment utilisée comme marqueur de phénotypes épithéliaux de type basal ou activés. En tant qu’élément du réseau de filaments intermédiaires, elle interagit avec des programmes de signalisation qui coordonnent l’organisation du cytosquelette, les réponses au stress cellulaire et l’homéostasie tissulaire.

Cytokeratin 17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KRT17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cytokeratin 17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KRT17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KRT17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cytokeratin 17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KRT17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cytokeratin 17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cytokeratin 17 dans les cellules tumorales présentant une expression de KRT17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.