CYTIP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432749

Panoramica

Cytip (proteina interagente con la citoesina 1) codifica CYTIP, un adattatore che regola la segnalazione delle citoesine/ARF GTPasi e contribuisce a coordinare l’adesione dipendente dalle integrine e il rimodellamento del citoscheletro. Nelle cellule immunitarie, CYTIP partecipa alla segnalazione inside-out che modula le interazioni LFA-1/ICAM, influenzando la motilità dei leucociti, la stabilità della sinapsi immunologica e la dinamica dei contatti cellula–cellula. Attraverso questi ruoli, Cytip è associato a vie che governano l’attivazione dei linfociti, la migrazione e l’infiltrazione tissutale, risultando quindi rilevante per studi meccanicistici della regolazione immunitaria e di fenotipi associati all’infiammazione. La perturbazione di Cytip nel topo è pertanto utile per chiarire come la segnalazione di adesione si interfacci con i programmi a valle di polarizzazione e trafficking in vivo e in modelli immunitari in coltura.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CYTIP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cytip in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cytip insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cytip a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CYTIP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cytip per lo studio della segnalazione di CYTIP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cytip critici per la funzione di CYTIP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cytip per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CYTIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CYTIP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cytip. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CYTIP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CYTIP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cytip per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cytip definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.