cystatin D Plasmide Double Nickase (h): sc-405049-NIC

CST5 codifica la cistatina D, una cistatina di tipo 2 secreta che inibisce le proteasi cisteiniche lisosomiali ed extracellulari, come le catepsine, contribuendo così a regolare la proteolisi, la processazione dell’antigene e l’omeostasi della barriera epiteliale. Modulando l’attività delle catepsine, la cistatina D può influenzare il turnover della matrice extracellulare e le vie di segnalazione dipendenti dalle proteasi, rilevanti per il rimodellamento tissutale e le risposte infiammatorie. Un’espressione alterata di CST5 o uno squilibrio tra proteasi e inibitori è stato associato a cambiamenti nel comportamento del microambiente tumorale, alla proteolisi legata all’invasione e alla fisiopatologia delle mucose, sostenendone l’impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla proteostasi e sulla biologia epiteliale. CST5 è quindi un bersaglio utile per analizzare come il controllo delle catepsine modelli la differenziazione cellulare, le risposte allo stress e la comunicazione intercellulare in sistemi modello umani.

cystatin D Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CST5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CST5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CST5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CST5 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.