Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CYP21A2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402919-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CYP21A2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CYP21A2 Double Nickase Plasmid (h) e il CYP21A2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CYP21A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CYP21A2 Antibody (B-7): sc-518265
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CYP21A2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402919-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CYP21A2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402919-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CYP21A2 codifica l’enzima del citocromo P450 steroide 21-idrossilasi, una monoossigenasi associata al reticolo endoplasmatico, necessaria per la steroidogenesi surrenalica. Catalizza passaggi chiave di idrossilazione nelle vie biosintetiche che portano alla produzione di cortisolo e aldosterone, influenzando così l’omeostasi dei glucocorticoidi e dei mineralcorticoidi. L’attività di CYP21A2 si integra con le reti steroidogeniche mitocondriali e microsomiali, inclusi il trasferimento di elettroni da NADPH tramite la P450 ossidoreduttasi e la regolazione coordinata dei programmi di zonazione surrenalica. Le varianti a perdita di funzione di CYP21A2 sono fortemente associate all’iperplasia surrenalica congenita dovuta a deficit di 21-idrossilasi, rendendolo un bersaglio centrale per lo studio della biosintesi degli steroidi e dei meccanismi delle patologie endocrine in modelli cellulari umani.
CYP21A2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CYP21A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CYP21A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CYP21A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CYP21A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.