CXCR-4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400254-ACT

CXCR4 codifica per il recettore delle chemochine CXCR-4, un GPCR a sette domini transmembrana che lega CXCL12/SDF-1 per regolare la chemiotassi, il posizionamento cellulare e l’homing tissutale nei compartimenti ematopoietico, immunitario e stromale. La segnalazione di CXCR-4 attiva vie a valle tra cui l’inibizione del cAMP mediata da Gαi, PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLC–PKC e i flussi di calcio, integrando segnali che influenzano migrazione, sopravvivenza e adesione. Un’attività deregolata di CXCR4 è stata implicata in un traffico leucocitario alterato, in microambienti infiammatori e in programmi aberranti di motilità cellulare. Queste funzioni rendono CXCR4 un nodo ampiamente utilizzato per studiare la migrazione guidata dai recettori, le interazioni con la nicchia e i fenotipi guidati dal microambiente in modelli cellulari umani.

CXCR-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CXCR4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CXCR-4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CXCR4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CXCR4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CXCR-4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CXCR4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CXCR-4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CXCR-4 nelle cellule tumorali con espressione di CXCR4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.