CSN1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404934-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CSN1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CSN1 Double Nickase Plasmid (h) e il CSN1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GPS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CSN1 Antibody (E-4): sc-514086
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CSN1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CSN1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano GPS1 codifica la subunità 1 del signalosoma COP9 (CSN1), un componente centrale del signalosoma COP9 che regola le ligasi ubiquitina cullin-RING controllando la neddilazione delle culline e coordinando il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso questa attività, CSN1 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la segnalazione da stress, intersecando vie quali MAPK e NF-κB che modellano i programmi trascrizionali e la proteostasi. L’alterazione della funzione del signalosoma COP9 è stata associata a una stabilità modificata di regolatori chiave, tra cui cicline e fattori di trascrizione, contribuendo a proliferazione disregolata e a difetti nel mantenimento del genoma. GPS1/CSN1 è quindi di interesse per studi meccanicistici in biologia del cancro, nella segnalazione legata all’infiammazione e, più in generale, nelle indagini sul controllo della via ubiquitina–proteasoma.
CSN1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.