CPS2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403519

Panoramica

CAD codifica un complesso enzimatico citosolico multifunzionale che catalizza i primi passaggi irreversibili della biosintesi de novo delle pirimidine; CPS2 (carbamoil-fosfato sintetasi 2) avvia la conversione di glutammina e bicarbonato verso la produzione di UMP. Questa attività sostiene l’omeostasi dei pool di nucleotidi necessaria per la replicazione del DNA, la trascrizione dell’RNA e la sintesi dei fosfolipidi di membrana, collegando la funzione di CAD alla progressione del ciclo cellulare e all’adattamento metabolico. CAD è regolata da vie di segnalazione di nutrienti e fattori di crescita, includendo il controllo allosterico da parte del PRPP e l’inibizione a feedback da parte dell’UTP, ed è modulata dalla fosforilazione a valle della segnalazione MAPK/mTOR. Una deregolazione del metabolismo delle pirimidine e un’alterazione dell’attività di CAD sono state associate a fenotipi proliferativi e alla riprogrammazione metabolica osservati in molteplici contesti patologici, rendendola un nodo utile per studiare le risposte allo stress da nucleotidi e il mantenimento del genoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CPS2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CAD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CAD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CAD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CPS2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CAD per lo studio della segnalazione di CPS2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CAD critici per la funzione di CPS2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CAD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CPS2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CAD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CPS2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CPS2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CAD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CAD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.