COL7A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401235-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL7A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL7A1 Double Nickase Plasmid (h) e il COL7A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL7A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COL7A1 Antibody (4D2): sc-33710
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL7A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401235-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL7A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401235-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL7A1 codifica il collagene di tipo VII (COL7A1), un componente strutturale chiave delle fibrille di ancoraggio che fissano la membrana basale dell’epidermide al derma sottostante e sostengono l’integrità cutanea. Questa proteina della matrice extracellulare contribuisce all’assemblaggio e alla stabilità della membrana basale attraverso interazioni con le laminine, il collagene di tipo IV e altre proteine della giunzione dermo-epidermica, collegando l’organizzazione della matrice all’adesione cellula–matrice e alla meccanotrasduzione. L’alterazione della funzione di COL7A1 è fortemente associata a fenotipi ereditari di fragilità cutanea, tra cui l’epidermolisi bollosa distrofica, rendendolo un locus ampiamente studiato nella biologia epiteliale e nel rimodellamento della matrice. COL7A1 è inoltre utilizzato come punto di ingresso molecolare per investigare i processi di riparazione delle ferite, il crosstalk cheratinociti–fibroblasti e la dinamica della matrice extracellulare in modelli cellulari umani.
COL7A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL7A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL7A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL7A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL7A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.