COL4A5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401199-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL4A5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL4A5 Double Nickase Plasmid (h) e il COL4A5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL4A5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL4A5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401199-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL4A5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401199-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL4A5 codifica la catena α5 del collagene di tipo IV, un componente strutturale fondamentale delle membrane basali che, insieme a COL4A3 e COL4A4, si assembla nella rete α3α4α5(IV). Questa impalcatura collagenica specializzata sostiene l’integrità delle membrane basali glomerulari, cocleari e oculari e influenza l’adesione cellula–matrice, la meccanotrasduzione e il rimodellamento della matrice extracellulare attraverso interazioni con le integrine e le relative vie di segnalazione. L’alterazione di COL4A5 modifica la composizione della membrana basale e le proprietà della barriera di filtrazione, collegando la sua disfunzione a nefropatie ereditarie e a manifestazioni sindromiche che interessano udito e vista. Per questo COL4A5 è ampiamente studiato nello sviluppo renale, nella biologia dei podociti e nell’organizzazione della matrice extracellulare mediante modelli cellulari e organoidi.
COL4A5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL4A5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL4A5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL4A5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL4A5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.