COL4A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419744

Panoramica

Col4a2 codifica la catena α2 del collagene di tipo IV (COL4A2), un componente strutturale fondamentale delle membrane basali che forma una rete eterotrimerica con altre catene del collagene IV a sostegno dell’architettura tissutale. Questo impalcato della matrice extracellulare regola l’adesione, la migrazione e la polarità cellulare e modula il crosstalk di segnalazione con le integrine e con le vie dei fattori di crescita coinvolte nella stabilità vascolare e nello sviluppo degli organi. Un’alterazione della funzione di COL4A2 è associata a fragilità della membrana basale e a patologie dei piccoli vasi, rendendolo rilevante per studi sull’integrità cerebrovascolare, sullo sviluppo oculare e sulle barriere di filtrazione renale. Nei modelli murini, Col4a2 rappresenta un punto di accesso pratico per analizzare i meccanismi guidati dalla matrice che influenzano il comportamento endoteliale ed epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL4A2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Col4a2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Col4a2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Col4a2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL4A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Col4a2 per lo studio della segnalazione di COL4A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Col4a2 critici per la funzione di COL4A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Col4a2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL4A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal COL4A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Col4a2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL4A2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR COL4A2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Col4a2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Col4a2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.