Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL4A2 (m): sc-419744

Présentation

Col4a2 code la chaîne α2 du collagène de type IV (COL4A2), un composant structural central des membranes basales qui forme, avec d’autres chaînes de collagène IV, un réseau hétérotrimérique assurant le soutien de l’architecture tissulaire. Cette charpente de matrice extracellulaire régule l’adhésion, la migration et la polarité cellulaires, et module les interactions de signalisation avec les intégrines ainsi qu’avec les voies des facteurs de croissance impliquées dans la stabilité vasculaire et le développement des organes. Une altération de la fonction de COL4A2 est associée à une fragilité des membranes basales et à des atteintes des petits vaisseaux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’intégrité cérébrovasculaire, du développement oculaire et des barrières de filtration rénales. Dans des modèles murins, Col4a2 constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer des mécanismes pilotés par la matrice influençant le comportement endothélial et épithélial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL4A2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Col4a2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Col4a2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Col4a2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL4A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Col4a2 pour l'étude de la signalisation de COL4A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Col4a2 essentiels à la fonction de COL4A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Col4a2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL4A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le COL4A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Col4a2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL4A2 plasmide HDR (m) et le COL4A2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Col4a2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Col4a2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.