COL1A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400598

Panoramica

COL1A2 codifica la catena pro-α2 del collagene di tipo I, un collagene fibrillare principale che si assembla in eterotrimeri e conferisce resistenza alla trazione ai tessuti connettivi. Dopo la secrezione e la processazione extracellulare, il collagene di tipo I viene incorporato nella matrice extracellulare (ECM), dove regola l’architettura tissutale e la meccanotrasduzione attraverso segnali dipendenti da integrine e dai recettori a dominio discoidina (DDR). L’espressione di COL1A2 e la fibrillogenesi del collagene si interfacciano con le vie di rimodellamento dell’ECM, inclusi il signaling del TGF-β, l’attività delle metalloproteinasi della matrice e i programmi di attivazione dei fibroblasti. Una regolazione alterata di COL1A2 contribuisce a modifiche della rigidità della matrice e a una deposizione aberrante di collagene ed è implicata in patologie ereditarie del tessuto connettivo e in contesti di rimodellamento fibrotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL1A2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL1A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL1A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL1A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL1A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL1A2 per lo studio della segnalazione di COL1A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL1A2 critici per la funzione di COL1A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL1A2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL1A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL1A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL1A2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL1A2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL1A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL1A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.