Plasmide CRISPR/Cas9 KO COL1A2 (h): sc-400598

Présentation

COL1A2 code la chaîne pro-α2 du collagène de type I, un collagène fibrillaire majeur qui s’assemble en hétérotrimères et confère une résistance à la traction aux tissus conjonctifs. Après sa sécrétion et sa maturation extracellulaire, le collagène de type I est incorporé à la matrice extracellulaire (MEC), où il régule l’architecture tissulaire et la mécanotransduction via des voies de signalisation dépendantes des intégrines et des récepteurs à domaine discoïdine (DDR). L’expression de COL1A2 et la fibrillogenèse du collagène s’articulent avec les voies de remodelage de la MEC, notamment la signalisation TGF-β, l’activité des métalloprotéinases matricielles et les programmes d’activation des fibroblastes. Une dérégulation de COL1A2 contribue à une modification de la rigidité matricielle et à un dépôt anormal de collagène, et est impliquée dans des maladies héréditaires du tissu conjonctif ainsi que dans des contextes de remodelage fibrotique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO COL1A2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COL1A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COL1A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COL1A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine COL1A2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COL1A2 pour l'étude de la signalisation de COL1A2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COL1A2 essentiels à la fonction de COL1A2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COL1A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le COL1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le COL1A2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COL1A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le COL1A2 plasmide HDR (h) et le COL1A2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COL1A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COL1A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.