COL17A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419738

Panoramica

Col17a1 codifica il collagene di tipo XVII alfa 1 (COL17A1), un collagene transmembrana e componente centrale degli emidesmosomi che ancora i cheratinociti basali alla membrana basale sottostante. COL17A1 interagisce con la laminina-332 e con complessi di integrine per sostenere l’adesione epidermica, l’organizzazione della membrana basale e l’omeostasi degli annessi cutanei, e il suo shedding regolato dell’ectodominio influenza la migrazione dei cheratinociti e il rimodellamento associato alle ferite. Nei tessuti murini, COL17A1 contribuisce all’integrità epiteliale e alla meccanotrasduzione alla giunzione dermo-epidermica, collegando i segnali della matrice extracellulare alla stabilità del citoscheletro. L’alterazione della funzione di COL17A1 è di ampia rilevanza per studi sulla fragilità cutanea, fenotipi bollosi, ciclo del follicolo pilifero e difetti della barriera epiteliale associati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL17A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Col17a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Col17a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Col17a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL17A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Col17a1 per lo studio della segnalazione di COL17A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Col17a1 critici per la funzione di COL17A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Col17a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL17A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal COL17A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Col17a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL17A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR COL17A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Col17a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Col17a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.