COL10A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401960-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL10A1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL10A1 Double Nickase Plasmid (h) e il COL10A1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL10A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL10A1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401960-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL10A1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401960-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
COL10A1 codifica per la catena alfa 1 del collagene di tipo X, un collagene a catena corta prodotto selettivamente dai condrociti ipertrofici e incorporato nella matrice extracellulare della cartilagine durante l’ossificazione endocondrale. Modellando la composizione e la mineralizzazione della matrice, COL10A1 contribuisce alla maturazione della placca di accrescimento, ai programmi di differenziamento dei condrociti e alla segnalazione matrice extracellulare–recettore, che si interfaccia con vie come TGF-β/BMP e la meccanotrasduzione mediata dalle integrine. Un’espressione o una funzione disregolata di COL10A1 è associata a uno sviluppo scheletrico anomalo ed è stata riportata come marcatore di ipertrofia e rimodellamento cartilaginei aberranti in contesti di patologie muscoloscheletriche. Inoltre, i pattern di espressione di COL10A1 vengono utilizzati per indagare stati di cartilagine ipertrofica in modelli di biologia dello sviluppo e di ingegneria tissutale.
COL10A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL10A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL10A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL10A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL10A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.