COG5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411474

Panoramica

COG5 codifica una subunità centrale del complesso di ancoraggio COG (conserved oligomeric Golgi), che coordina il traffico vescicolare retrogrado all’interno dell’apparato di Golgi. Supportando l’attracco delle vescicole e la fusione dipendente dagli SNARE, COG5 contribuisce a mantenere l’architettura del Golgi, la localizzazione degli enzimi e l’efficiente processamento del carico secretorio. L’alterazione della funzione del complesso COG perturba l’omeostasi della glicosilazione e può modificare la composizione della superficie cellulare e della matrice extracellulare, influenzando vie legate allo smistamento proteico, alla secrezione e all’organizzazione delle membrane. Varianti in COG5 e in altri componenti correlati del complesso COG sono state associate a disordini congeniti della glicosilazione e a fenotipi più ampi connessi a un traffico golgiano difettoso.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COG5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COG5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COG5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COG5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COG5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COG5 per lo studio della segnalazione di COG5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COG5 critici per la funzione di COG5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COG5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COG5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COG5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COG5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COG5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COG5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COG5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COG5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.