CLPTM1L Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408971-LAC

CLPTM1L (cleft lip and palate transmembrane protein 1-like) codifica una proteina di membrana multipasso, arricchita nelle membrane intracellulari e collegata all’adattamento cellulare allo stress. È stata associata alla regolazione dell’apoptosi e dei segnali di sopravvivenza, incluse le risposte allo stress genotossico e alle perturbazioni dell’omeostasi del reticolo endoplasmatico, e può influenzare il traffico intracellulare o complessi proteici associati alle membrane. Varianti genetiche e alterazioni dell’espressione di CLPTM1L sono state riportate in molteplici contesti oncologici, a supporto dell’indagine sul suo contributo alla fitness delle cellule tumorali, alla tolleranza allo stress da trattamento e a dipendenze specifiche di linea cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale CLPTM1L (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CLPTM1L in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CLPTM1L (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CLPTM1L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CLPTM1L. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CLPTM1L e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.