CLPTM1L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408971-ACT

CLPTM1L (cleft lip and palate transmembrane protein 1-like) codifica una proteina di membrana multipasso che si localizza prevalentemente in compartimenti di membrana intracellulari ed è stata associata alla regolazione della sopravvivenza cellulare in condizioni di stress. Studi funzionali collegano CLPTM1L alla segnalazione apoptotica, alle risposte allo stress ossidativo e alla modulazione di vie che influenzano la proliferazione e la tolleranza al danno del DNA. Evidenze genetiche e di espressione mettono in relazione CLPTM1L con loci di suscettibilità al cancro e con la biologia tumorale, in cui un’attività alterata è stata correlata a cambiamenti nella chemioresistenza e nei fenotipi di sopravvivenza. Di conseguenza, CLPTM1L è spesso studiato in modelli di trasformazione oncogenica, adattamento allo stress e nei meccanismi che governano le decisioni sul destino cellulare.

CLPTM1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLPTM1L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLPTM1L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLPTM1L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLPTM1L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLPTM1L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLPTM1L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLPTM1L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLPTM1L nelle cellule tumorali con espressione di CLPTM1L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.