CLEC-2D Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-412035-ACT

CLEC2D codifica CLEC-2D, un ligando di tipo lectina C esposto sulla superficie cellulare che modula il riconoscimento immunitario attraverso interazioni con i recettori delle cellule NK, in particolare NKG2D e CD161 (KLRB1). Modellando i segnali attivatori e inibitori alla sinapsi immunologica, CLEC-2D influenza la citotossicità delle NK, il rilascio di citochine e, più in generale, la sorveglianza immunitaria in microambienti infiammatori e associati ai tumori. La sua espressione è regolata dinamicamente dallo stress cellulare e dagli stati di differenziamento, collegando CLEC2D a vie che controllano l’elusione immunitaria, il dialogo tra leucociti e l’omeostasi tissutale. Alterazioni dei livelli di CLEC2D sono state riportate in molteplici neoplasie e condizioni immuno-mediate, a supporto del suo impiego come strumento molecolare per studiare l’escape immunitario, la citotossicità indipendente dall’antigene e fenotipi immunoregolatori.

CLEC-2D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLEC2D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLEC-2D Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLEC2D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLEC2D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLEC-2D. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLEC2D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLEC-2D nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLEC-2D nelle cellule tumorali con espressione di CLEC2D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.