CKR-9 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419702-ACT

Il gene murino **Ccr9** codifica il recettore per chemochine **CKR-9 (CCR9)**, un GPCR che lega preferenzialmente **CCL25** per guidare il traffico dei leucociti, in particolare lo sviluppo dei timociti e l’homing intestinale di sottopopolazioni di cellule T. La segnalazione di CCR9 attiva le vie canoniche delle chemochine, includendo risposte dipendenti da **Gαi**, flussi di **calcio** intracellulare, le cascate **PI3K–AKT** e **MAPK**, che coordinano chemiotassi, adesione e localizzazione tissutale. Un’attività alterata dell’asse **CCR9–CCL25** è stata collegata a una deregolazione dell’immunità mucosale e a processi infiammatori, ed è spesso studiata in contesti quali l’omeostasi immunitaria intestinale e la migrazione dei linfociti. Nei modelli murini, l’espressione di **Ccr9** è inoltre utilizzata come marcatore e determinante funzionale di programmi di cellule immunitarie residenti nei tessuti e migratorie, rilevanti per i meccanismi di malattie immunomediate.

CKR-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ccr9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CKR-9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ccr9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ccr9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CKR-9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ccr9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CKR-9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CKR-9 nelle cellule tumorali con espressione di Ccr9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.