Plasmide Double Nickase (h) CKR-4: sc-404778-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CKR-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CKR-4 Double Nickase (h) et le plasmide CKR-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CCR4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CKR-4 Antibody (G-2): sc-377357
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CKR-4 | sc-404778-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CKR-4 | sc-404778-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CCR4 (CKR-4) code un récepteur de chimiokines de type CC principalement exprimé par certains sous-ensembles de lymphocytes T, notamment les Th2 et les lymphocytes T régulateurs, où il médie des réponses chimiotactiques à des ligands tels que CCL17 et CCL22. En tant que RCPG de classe A, CKR-4 transmet ses signaux via des protéines Gi afin de moduler l’AMPc ainsi que les cascades PI3K–AKT et MAPK, influençant le remodelage du cytosquelette, l’adhérence et la migration dirigée. Le trafic dépendant de CCR4 façonne la localisation des cellules immunitaires dans les tissus lymphoïdes et périphériques et contribue à l’organisation des microenvironnements inflammatoires. Une activité et des profils d’expression de CCR4 dérégulés ont été associés à l’inflammation d’origine immunitaire et au recrutement de cellules immunitaires lié aux tumeurs, ce qui étaye son intérêt comme cible pour des études mécanistiques en immunologie.
CKR-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CCR4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CCR4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CCR4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CCR4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.