CKR-10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407896-ACT

CCR10 (CKR-10) è un recettore per chemochine della famiglia dei GPCR che lega i ligandi CCL27 e CCL28 per regolare il traffico leucocitario direzionale, l’homing tissutale e il posizionamento delle cellule immunitarie nelle barriere epiteliali. In seguito al legame con il ligando, CCR10 si accoppia alle proteine Gαi per modulare la segnalazione dei secondi messaggeri e vie a valle come PI3K/AKT e MAPK, influenzando chemiotassi, dinamiche di adesione e risposte citochiniche. CCR10 è spesso studiato nel contesto dell’immunologia cutanea e delle mucose, dove contribuisce alla localizzazione dei linfociti e alla formazione di circuiti infiammatori. Un’espressione disregolata di CCR10 è stata associata a un’infiltrazione immunitaria aberrante e al rimodellamento del microambiente tumorale, a sostegno della sua rilevanza negli studi su infiammazione e biologia del cancro.

CKR-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CCR10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CKR-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CCR10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CCR10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CKR-10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CCR10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CKR-10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CKR-10 nelle cellule tumorali con espressione di CCR10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.