CIP2A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401363-ACT

L’inibitore cancerogeno di PP2A (CIP2A) codifica un’oncoproteina umana che inibisce la fosfatasi serina/treonina PP2A, mantenendo così la segnalazione dipendente dalla fosforilazione e stabilizzando fattori che promuovono la crescita, come MYC. Antagonizzando l’attività oncosoppressiva di PP2A, CIP2A sostiene vie proliferative e pro-sopravvivenza, incluse le vie di segnalazione PI3K/AKT e MAPK, e contribuisce ad alterazioni della progressione del ciclo cellulare e delle risposte allo stress. Un’elevata espressione di CIP2A è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è associata a fenotipi aggressivi e a stati di segnalazione legati alla resistenza, rendendolo un nodo utile per studiare le reti oncogeniche controllate dalle fosfatasi.

CIP2A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CIP2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CIP2A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CIP2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CIP2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CIP2A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CIP2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CIP2A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CIP2A nelle cellule tumorali con espressione di CIP2A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.