CHMP1A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406556

Panoramica

CHMP1A (charged multivesicular body protein 1A) è un componente fondamentale della macchina ESCRT-III, che rimodella le membrane per guidare la biogenesi dei corpi multivescicolari e lo smistamento del carico endosomiale verso la degradazione lisosomiale. Attraverso processi dipendenti da ESCRT, CHMP1A contribuisce alla downregulation dei recettori, a eventi di scissione di membrana e, più in generale, alla regolazione della proteostasi, della citochinesi e della dinamica dell’involucro nucleare. L’alterazione del traffico endolisosomiale associato a CHMP1A può modificare la durata delle vie di segnalazione e l’omeostasi cellulare, collegando la disfunzione di ESCRT a fenotipi neurosviluppativi e ad altri disturbi caratterizzati da un traffico di membrana compromesso. In quanto gene umano, CHMP1A è spesso studiato in contesti in cui la maturazione degli endosomi e il controllo della segnalazione mediata da vescicole sono centrali per stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CHMP1A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHMP1A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHMP1A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHMP1A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CHMP1A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHMP1A per lo studio della segnalazione di CHMP1A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHMP1A critici per la funzione di CHMP1A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHMP1A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CHMP1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CHMP1A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHMP1A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CHMP1A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CHMP1A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHMP1A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHMP1A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.