cGAS Plasmide Double Nickase (m): sc-437363-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- cGAS Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il cGAS Double Nickase Plasmid (m) e il cGAS Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Mb21d1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: cGAS Antibody (D-9): sc-515777
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
cGAS Plasmide Double Nickase (m) | sc-437363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cGAS Plasmide Double Nickase (m2) | sc-437363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Mb21d1** codifica la **cGMP–AMP sintasi ciclica (cGAS)**, un sensore citosolico del DNA che catalizza la produzione del secondo messaggero **2′3′-cGAMP** quando si lega al DNA a doppio filamento. Il cGAMP attiva **STING (TMEM173)** inducendo la segnalazione **TBK1/IRF3** e **NF-κB**, che promuove programmi genici di interferone di tipo I e infiammatori, centrali per la sorveglianza immunitaria innata. L’attività di cGAS influenza le difese antivirali e antibatteriche, le risposte all’instabilità genomica e gli effetti immunogenici della fuoriuscita di DNA mitocondriale o nucleare. Una segnalazione cGAS–STING deregolata è associata a fenotipi infiammatori e a processi rilevanti per l’autoimmunità, e può modulare le interazioni tra tumore e sistema immunitario in modelli di cancro.
cGAS Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mb21d1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mb21d1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mb21d1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mb21d1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.