Plasmide CRISPR d'Activation (h) CEP55: sc-417522-ACT

Le CEP55 humain (centrosomal protein 55) est un régulateur de la cytocinèse qui se localise au corps intermédiaire (midbody) et coordonne l’abscission durant la mitose tardive en mobilisant la machinerie de fission membranaire dépendante d’ESCRT. Par ses rôles dans la fonction du centrosome, l’organisation du fuseau et la progression du cycle cellulaire, CEP55 contribue à maintenir la fidélité de la prolifération et une séparation correcte des cellules filles. Une expression altérée de CEP55 a été associée à l’instabilité chromosomique et à des programmes de prolifération dérégulés observés dans de multiples contextes cancéreux. Par conséquent, CEP55 est fréquemment étudié dans les voies reliant le contrôle mitotique, le maintien du génome et la fitness des cellules tumorales.

CEP55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEP55 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CEP55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEP55 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEP55, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CEP55. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEP55 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CEP55 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CEP55 dans les cellules tumorales présentant une expression de CEP55 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.