CEP350 Plasmide Double Nickase (h): sc-406478-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CEP350 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CEP350 Double Nickase Plasmid (h) e il CEP350 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CEP350. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CEP350 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406478-NIC | 20 µg | $410.00 |
CEP350 (proteina centrosomiale 350) è una grande proteina “scaffold” associata al centrosoma, ricca di domini a coiled-coil, che si localizza prevalentemente al centrosoma e al centriolo madre, dove contribuisce a organizzare la nucleazione e l’ancoraggio dei microtubuli. Attraverso interazioni con fattori centrosomiali e associati all’apparato di Golgi, CEP350 contribuisce all’integrità del centrosoma, all’organizzazione del fuso mitotico e a processi legati alle ciglia che dipendono dal corretto funzionamento dei centrioli. Una corretta attività di CEP350 sostiene la progressione del ciclo cellulare e la stabilità del genoma coordinando la duplicazione del centrosoma e le dinamiche dei microtubuli durante la mitosi. La disregolazione dell’architettura del centrosoma e dell’organizzazione dei microtubuli che coinvolge CEP350 è rilevante negli studi sull’instabilità cromosomica e sui fenotipi cellulari associati alle ciliopatie.
CEP350 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CEP350 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CEP350. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CEP350. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CEP350 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.