Plasmide Double Nickase (h) CEP350: sc-406478-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CEP350 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CEP350 Double Nickase (h) et le plasmide CEP350 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CEP350. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CEP350 | sc-406478-NIC | 20 µg | $410.00 |
CEP350 (protéine centrosomale 350) est une grande protéine d’échafaudage associée au centrosome, riche en domaines en coiled-coil, qui se localise principalement au centrosome et au centriole mère, où elle contribue à l’organisation de la nucléation et de l’ancrage des microtubules. Grâce à ses interactions avec des facteurs centrosomaux et associés à l’appareil de Golgi, CEP350 participe à l’intégrité du centrosome, à l’organisation du fuseau mitotique et à des processus liés aux cils qui dépendent d’un fonctionnement précis des centrioles. Une activité correcte de CEP350 soutient la progression du cycle cellulaire et la stabilité du génome en coordonnant la duplication du centrosome et la dynamique des microtubules en mitose. La dérégulation de l’architecture du centrosome et de l’organisation des microtubules impliquant CEP350 est pertinente dans les études sur l’instabilité chromosomique et sur des phénotypes cellulaires associés aux ciliopathies.
CEP350 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CEP350 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CEP350. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CEP350. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CEP350.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.