CEACAM1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-417666-ACT

CEACAM1 (molecola di adesione cellulare 1 correlata all’antigene carcinoembrionario) è una glicoproteina di superficie cellulare umana appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, che media l’adesione omofilica ed eterofilica e regola la segnalazione tramite i suoi motivi citoplasmatici ITIM. Partecipa alla polarizzazione epiteliale, all’organizzazione delle tight junction e al controllo della crescita dipendente dal contatto, modulando inoltre l’attivazione delle cellule immunitarie e le risposte infiammatorie attraverso vie dipendenti da SHP. CEACAM1 si integra con programmi di comunicazione cellula-cellula che influenzano migrazione, comportamento angiogenico e rimodellamento tissutale, collegando il suo stato di espressione alla biologia tumorale e alla regolazione immunitaria. Un’espressione deregolata di CEACAM1 è stata riportata in molteplici tipi di tumore e in contesti infiammatori, rendendolo un nodo utile per studiare la segnalazione accoppiata all’adesione e le interazioni con il microambiente.

CEACAM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CEACAM1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CEACAM1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CEACAM1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CEACAM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CEACAM1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CEACAM1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CEACAM1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CEACAM1 nelle cellule tumorali con espressione di CEACAM1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.