Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cdk9: sc-400242-ACT

Le gène humain **CDK9** code la kinase dépendante des cyclines 9 (Cdk9), sous-unité catalytique du facteur positif d’élongation transcriptionnelle b (P-TEFb), qui phosphoryle le domaine C-terminal de l’ARN polymérase II afin de favoriser une élongation transcriptionnelle productive. En régulant la levée de la pause proximale au promoteur, Cdk9 coordonne l’expression des gènes de réponse immédiate, des programmes de réponse au stress, ainsi que des régulateurs du cycle cellulaire et de la survie, et intègre des signaux provenant de coactivateurs transcriptionnels et de facteurs associés à la chromatine. L’activité de CDK9 influence la maturation des ARN et la stabilité du génome en modulant des événements couplés à la transcription et en contrôlant la cinétique de l’expression génique. Une signalisation CDK9/P-TEFb dérégulée est fréquemment associée à des dépendances transcriptionnelles aberrantes pertinentes pour la biologie du cancer, la signalisation inflammatoire et le contrôle transcriptionnel virus–hôte, ce qui en fait une cible largement utilisée pour les études mécanistiques de la transcription.

Cdk9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDK9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdk9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDK9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDK9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdk9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDK9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdk9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdk9 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDK9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.