Cdk8 Plasmide Double Nickase (h): sc-400577-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk8 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdk8 Double Nickase Plasmid (h) e il Cdk8 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDK8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk8 Antibody (D-9): sc-13155
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk8 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400577-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdk8 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400577-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK8 codifica la chinasi ciclina‑dipendente 8, un componente centrale del modulo chinasi del complesso Mediator che fosforila i regolatori trascrizionali per modulare l’espressione genica dipendente dall’RNA polimerasi II. Cdk8 integra segnali provenienti da vie quali Wnt/β‑catenina, TGF‑β e Notch per influenzare la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e i programmi trascrizionali di risposta allo stress. Attraverso un controllo dipendente dal contesto dell’attività degli enhancer e del turnover dei fattori di trascrizione, CDK8 contribuisce a reti regolatorie associate alla cromatina che definiscono l’identità cellulare. Un’attività o un’espressione deregolata di CDK8 è stata collegata a circuiti trascrizionali aberranti osservati in molteplici modelli rilevanti per la malattia, inclusi contesti oncogenici e infiammatori.
Cdk8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDK8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDK8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDK8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDK8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.