Plasmide Double Nickase (h) Cdk8: sc-400577-NIC

CDK8 code la cycline‑dépendante kinase 8, un composant central du module kinase du complexe Mediator, qui phosphoryle des régulateurs transcriptionnels afin de moduler l'expression génique dépendante de l'ARN polymérase II. Cdk8 intègre des signaux issus de voies telles que Wnt/β‑caténine, TGF‑β et Notch pour influencer la progression du cycle cellulaire, la différenciation et des programmes transcriptionnels de réponse au stress. Grâce à un contrôle dépendant du contexte de l'activité des enhancers et du renouvellement des facteurs de transcription, CDK8 contribue à des réseaux régulateurs associés à la chromatine qui façonnent l'identité cellulaire. Une activité ou une expression dérégulée de CDK8 a été associée à des circuits transcriptionnels aberrants observés dans plusieurs modèles pertinents pour la maladie, notamment dans des contextes oncogéniques et inflammatoires.

Cdk8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK8.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.