Cdk8 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-435217-ACT
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdk8 Plasmide di attivazione CRISPR (m) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Cdk8 CRISPR Activation Plasmid (m) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Cdk8 CRISPR Activation Plasmid (m) e dal Cdk8 CRISPR Activation Plasmid (m2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di Cdk8. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdk8 Antibody (D-9): sc-13155
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdk8 Plasmide di attivazione CRISPR (m) | sc-435217-ACT | 20 µg | $397.00 |
La chinasi 8 dipendente dalle ciclina (Cdk8) è una chinasi associata al complesso Mediator che regola la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II integrando gli input di segnalazione con l’attività di promotori ed enhancer. Nelle cellule murine, CDK8 modula programmi trascrizionali a valle di vie come Wnt/β-catenina, TGF-β e MAPK, plasmando proliferazione, differenziamento ed espressione genica in risposta allo stress. Attraverso la fosforilazione di regolatori trascrizionali e di subunità del Mediator, CDK8 influenza il controllo del ciclo cellulare e le scelte di linea cellulare nello sviluppo e nell’omeostasi tissutale. Un’attività di CDK8 deregolata è stata collegata a stati trascrizionali alterati associati a segnalazione oncogenica e processi infiammatori, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sulla regolazione genica e sul crosstalk tra vie di segnalazione.
Cdk8 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Cdk8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Cdk8 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Cdk8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Cdk8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdk8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Cdk8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdk8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdk8 nelle cellule tumorali con espressione di Cdk8 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.