Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cdc25C Plasmide Double Nickase (h): sc-400833-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Cdc25C Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Cdc25C Double Nickase Plasmid (h) e il Cdc25C Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CDC25C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Cdc25C Antibody (H-6): sc-13138
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Cdc25C Plasmide Double Nickase (h) | sc-400833-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cdc25C Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400833-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25C codifica Cdc25C, una fosfatasi a doppia specificità che attiva il complesso CDK1–ciclina B rimuovendo fosfati inibitori, favorendo la transizione G2/M e l’ingresso in mitosi. La sua attività è strettamente controllata dalla segnalazione dei checkpoint, inclusi i percorsi ATR/CHK1 e quelli collegati a p53, che limitano Cdc25C in presenza di danno al DNA e stress replicativo per mantenere l’integrità del genoma. Un’alterata regolazione di CDC25C può perturbare la tempistica mitotica e contribuire all’instabilità cromosomica, rendendolo rilevante negli studi sulla deregolazione oncogenica del ciclo cellulare. Cdc25C interagisce anche con la sequestrazione mediata da 14-3-3 e con una localizzazione dipendente dalla fosforilazione, offrendo punti di accesso meccanicistici per analizzare l’adattamento ai checkpoint e il controllo della mitosi.
Cdc25C Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CDC25C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CDC25C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CDC25C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CDC25C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.