Cdc20 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400583-ACT

Il gene umano **CDC20** codifica Cdc20, un co-attivatore essenziale del complesso promotore dell’anafase/ciclosoma (APC/C), che controlla la transizione dalla metafase all’anafase promuovendo la degradazione mediata da ubiquitina di regolatori mitotici chiave, tra cui securina e ciclina B. Cdc20 integra i segnali del checkpoint di assemblaggio del fuso tramite interazioni con MAD2, BUBR1 e BUB3, per garantire una corretta segregazione dei cromosomi e mantenere la stabilità genomica. Un’espressione deregolata di CDC20 o l’elusione del checkpoint possono contribuire all’instabilità cromosomica e a una proliferazione anomala, rendendolo un nodo frequentemente studiato nel controllo del ciclo cellulare e nelle vie che assicurano la fedeltà mitotica. Gli studi incentrati su CDC20 sono ampiamente utilizzati per analizzare la dinamica dell’APC/C, la proteostasi durante la mitosi e i meccanismi che collegano gli errori mitotici a fenotipi di instabilità del genoma.

Cdc20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDC20 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cdc20 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDC20 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDC20, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdc20. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDC20 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdc20 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdc20 nelle cellule tumorali con espressione di CDC20 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.