CD89 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403014-ACT

FCAR codifica CD89 (FcαRI), un recettore Fc per l’immunoglobulina A (IgA) espresso principalmente sulle cellule mieloidi come neutrofili, monociti, macrofagi ed eosinofili. Il legame di CD89 con complessi immuni di IgA innesca una segnalazione dipendente dalla catena γ dei FcR tramite fosforilazione degli ITAM, attivando SYK, PI3K, MAPK e, a valle, programmi effettrici infiammatori e antimicrobici che includono fagocitosi, degranulazione, rilascio di citochine e citotossicità cellulare dipendente da anticorpi. Modulando l’immunità mediata da IgA a livello mucosale e sistemico, FCAR influenza il dialogo tra immunità innata e adattativa e la gestione dei complessi immuni. Una segnalazione deregolata di CD89 e un’alterata espressione del recettore sono state associate a patologie infiammatorie e autoimmuni, tra cui la nefropatia da IgA e altre malattie guidate da complessi immuni, a supporto della sua rilevanza per studi di immunologia meccanicistica.

CD89 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FCAR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD89 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FCAR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FCAR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD89. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FCAR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD89 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD89 nelle cellule tumorali con espressione di FCAR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.