Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD89: sc-403014-ACT

FCAR code pour CD89 (FcαRI), un récepteur Fc des immunoglobulines A (IgA) exprimé principalement par les cellules myéloïdes telles que les neutrophiles, les monocytes, les macrophages et les éosinophiles. La liaison de CD89 par des complexes immuns d’IgA déclenche une signalisation dépendante de la chaîne γ des FcR via la phosphorylation des ITAM, activant SYK, PI3K, MAPK et des programmes effecteurs inflammatoires et antimicrobiens en aval, notamment la phagocytose, la dégranulation, la libération de cytokines et la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps. En modulant l’immunité médiée par les IgA au niveau muqueux et systémique, FCAR influence le dialogue entre immunité innée et adaptative ainsi que la gestion des complexes immuns. Une signalisation de CD89 dérégulée et une expression altérée du récepteur ont été associées à des pathologies inflammatoires et auto-immunes, dont la néphropathie à IgA et d’autres maladies entraînées par des complexes immuns, ce qui souligne sa pertinence pour des études d’immunologie mécanistique.

CD89 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FCAR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD89 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FCAR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FCAR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD89. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FCAR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD89 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD89 dans les cellules tumorales présentant une expression de FCAR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.