CD33 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401011-ACT

Il gene umano **CD33** codifica una lectina di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico (Siglec-3), espressa prevalentemente sulle cellule della linea mieloide, dove agisce come recettore inibitorio attenuando l’attivazione cellulare. Attraverso la segnalazione mediata dal motivo inibitorio basato su tirosina dei recettori immunitari (ITIM) e il reclutamento di fosfatasi quali SHP-1/2, CD33 modula le soglie dell’immunità innata, le risposte citochiniche e i programmi fagocitici. CD33 partecipa al riconoscimento di glicani sialilati e influenza vie che regolano la differenziazione mieloide, la gestione/presentazione dell’antigene e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni dell’espressione e della segnalazione di CD33 sono state associate a neoplasie mieloidi e a contesti di neuroinfiammazione, a supporto del suo impiego come marcatore e come nodo meccanicistico nella ricerca sulla biologia ematopoietica e immunitaria.

CD33 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD33 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD33 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD33 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD33, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD33. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD33 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD33 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD33 nelle cellule tumorali con espressione di CD33 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.