CD2AP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419542

Panoramica

Cd2ap codifica la proteina associata a CD2 (CD2AP), un adattatore e scaffold che coordina il rimodellamento del citoscheletro di actina con il traffico di membrana in corrispondenza di giunzioni cellulari specializzate. Nelle cellule di topo, CD2AP partecipa all’endocitosi e allo smistamento vescicolare attraverso interazioni con il diaframma a fessura (slit diaphragm) e con il macchinario endocitico, sostenendo la polarità cellulare e le funzioni di barriera. Le reti collegate a CD2AP intersecano vie di segnalazione che regolano la dinamica dell’adesione e l’organizzazione del citoscheletro, rendendola un nodo utile per studiare la stabilità delle giunzioni e il turnover dei recettori. La perturbazione genetica di Cd2ap è stata associata a difetti della barriera di filtrazione glomerulare e a fenotipi renali proteinurici; inoltre viene utilizzata per analizzare l’organizzazione della sinapsi immunologica e l’integrità epiteliale in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD2AP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd2ap in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd2ap insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd2ap a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD2AP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd2ap per lo studio della segnalazione di CD2AP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd2ap critici per la funzione di CD2AP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd2ap per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD2AP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD2AP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd2ap. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD2AP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD2AP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd2ap per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd2ap definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.