CD16 Plasmide Double Nickase (h): sc-400544-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CD16 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CD16 Double Nickase Plasmid (h) e il CD16 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FCGR3A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CD16 Antibody (DJ130c): sc-20052
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CD16 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400544-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD16 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400544-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FCGR3A codifica CD16 (FcγRIIIa), un recettore a bassa affinità per la porzione Fc delle IgG, espresso in modo marcato su cellule natural killer, monociti e macrofagi, dove collega il riconoscimento degli anticorpi alle funzioni effettrici cellulari. CD16 trasduce il segnale tramite le catene adattatrici FcRγ e CD3ζ contenenti motivi ITAM, attivando chinasi della famiglia Src, le vie SYK/ZAP70, il flusso di calcio e i programmi a valle MAPK e NF-κB che regolano degranulazione, rilascio di citochine e citotossicità cellulare dipendente da anticorpi. Le variazioni genetiche e l’alterata espressione di FCGR3A influenzano la gestione dei complessi immuni e i “set point” infiammatori, collegando questo asse all’autoimmunità e alla disregolazione immunitaria. La biologia di CD16 è inoltre centrale negli studi sull’attivazione dell’immunità innata, sulla polarizzazione delle cellule mieloidi e sulle risposte mediate da anticorpi in modelli oncologici e di malattie infettive.
CD16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FCGR3A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FCGR3A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FCGR3A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FCGR3A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.