CBARA1/MICU1 Plasmide Double Nickase (h): sc-418304-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CBARA1/MICU1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CBARA1/MICU1 Double Nickase Plasmid (h) e il CBARA1/MICU1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MICU1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CBARA1/MICU1 Antibody (D-10): sc-518183
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CBARA1/MICU1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-418304-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CBARA1/MICU1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-418304-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MICU1 (CBARA1) codifica una subunità regolatoria legante il Ca2+ del complesso dell’uniporter mitocondriale del calcio, che contribuisce a definire la soglia di captazione mitocondriale di Ca2+ in risposta ai segnali di calcio citosolico. Modulando l’omeostasi mitocondriale del Ca2+, MICU1 influenza la fosforilazione ossidativa, l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e l’accoppiamento tra segnalazione del Ca2+ e output metabolico, con effetti a valle su apoptosi e adattamento allo stress. Un’alterazione della funzione di MICU1 è stata collegata a fenotipi neuromuscolari e di neurosviluppo, in linea con il suo ruolo nel mantenere la stabilità bioenergetica mitocondriale nei tessuti eccitabili. MICU1 è quindi ampiamente studiato nei percorsi che collegano la segnalazione mitocondriale, il metabolismo cellulare e le risposte trascrizionali dipendenti dal Ca2+.
CBARA1/MICU1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MICU1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MICU1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MICU1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MICU1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.