Plasmide Double Nickase (h) calsequestrin 2: sc-402912-NIC

CASQ2 code la calséquestrine 2, une protéine de liaison au Ca2+ à forte capacité et d’affinité modérée, localisée dans la lumière du réticulum sarcoplasmique des cardiomyocytes, où elle tamponne le Ca2+ et contribue à façonner le couplage excitation–contraction. En interagissant avec les complexes du récepteur à la ryanodine et des protéines accessoires luminales, la calséquestrine 2 participe à la dynamique de libération du Ca2+, à la stabilité des réserves et à la signalisation dépendante du calcium qui coordonne la contraction et la relaxation cardiaques. Une altération de la fonction de CASQ2 est associée à une gestion intracellulaire anormale du Ca2+ et à des phénotypes arythmogènes déclenchés par le stress, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de l’homéostasie du Ca2+ du réticulum sarcoplasmique. CASQ2 est donc largement utilisé en recherche sur l’électrophysiologie cardiaque, les réseaux du cycle du calcium et les mécanismes de susceptibilité héréditaire aux arythmies.

calsequestrin 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASQ2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASQ2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASQ2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASQ2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.