Calretinin Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401389-NIC

O CALB2 humano codifica a calretinina, uma proteína ligante de cálcio do tipo EF-hand que atua como tampão de Ca2+ intracelular e molda a excitabilidade dependente de cálcio, a transmissão sináptica e a regulação gênica dependente de atividade. A calretinina é enriquecida em populações específicas de interneurônios e também é expressa em determinados tecidos periféricos, onde contribui para a dinâmica do citoesqueleto e o tráfego vesicular por meio de sinalização regulada por Ca2+. O CALB2 é comumente usado como marcador molecular de identidade de subtipos neuronais e de diferenciação mesotelial, vinculando sua expressão a estudos da organização de circuitos neurais e de programas de linhagem epitelial. A desregulação da expressão de CALB2 e alterações na homeostase de cálcio têm sido associadas a contextos do neurodesenvolvimento e da neurodegeneração, bem como à biologia tumoral em certos tipos de tecido, sustentando seu valor para pesquisas mecanísticas.

Calretinin O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CALB2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CALB2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CALB2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CALB2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.