CAB39L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416543

Panoramica

CAB39L codifica la proteina legante il calcio 39-like, un adattatore conservato che si associa alla chinasi serina/treonina STK11/LKB1 e promuove la formazione e la funzione del complesso di impalcatura LKB1–STRAD–CAB39. Attraverso questo complesso, CAB39L supporta l’attivazione delle chinasi della famiglia AMPK, collegando lo stato energetico cellulare al controllo metabolico, alle risposte allo stress e ai programmi di polarità. La segnalazione dipendente da CAB39L influenza processi quali l’omeostasi mitocondriale, la regolazione dell’autofagia e l’organizzazione epiteliale tramite vie correlate ad AMPK. La disregolazione dei componenti dell’asse LKB1–AMPK è implicata nella biologia dei tumori e nei meccanismi delle malattie metaboliche, rendendo CAB39L un nodo utile per indagare l’architettura delle vie di segnalazione e vulnerabilità specifiche del contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CAB39L (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CAB39L in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CAB39L insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CAB39L a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CAB39L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CAB39L per lo studio della segnalazione di CAB39L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CAB39L critici per la funzione di CAB39L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CAB39L per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CAB39L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CAB39L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CAB39L. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CAB39L Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CAB39L (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CAB39L per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CAB39L definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.